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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有什么？

免疫熒光（IF）是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。可用于檢測(cè)和識(shí)別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)及其他分子的亞細(xì)胞分布和遷移。那么你知道免疫熒光實(shí)驗(yàn)的注意事項(xiàng)有什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、設(shè)置對(duì)照可以使用陽性和陰性對(duì)照來確定結(jié)果的準(zhǔn)確性，并幫助確定任何問題的來源。二、樣品和試劑的存儲(chǔ)由于IF中所用抗體和實(shí)驗(yàn)樣品的熒光性質(zhì)，因此必須適當(dāng)存儲(chǔ)。最好將熒光抗體和經(jīng)過IF處理的樣品都保存在wan全黑暗的環(huán)境中。使用琥珀色或鋁箔覆蓋抗體管。三、使用適當(dāng)?shù)墓潭▌┤┛?..

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免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些？

免疫熒光（IF）是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項(xiàng)檢測(cè)技術(shù)。可用于檢測(cè)和識(shí)別細(xì)胞和組織中蛋白質(zhì)及其他分子的亞細(xì)胞分布和遷移。那么你知道免疫熒光實(shí)驗(yàn)的步驟有哪些嗎？讓我們一起來看看吧！一、細(xì)胞準(zhǔn)備對(duì)于單層生長的細(xì)胞，將細(xì)胞接種到預(yù)先處理過的蓋玻片的培養(yǎng)皿中，待細(xì)胞接近長成單層后取出蓋玻片，用PBS洗滌兩次。對(duì)于懸浮生長的細(xì)胞，取對(duì)數(shù)生長的細(xì)胞，用PBS離心洗滌（1000rpm,5min）兩次，然后用細(xì)胞離心甩片機(jī)制備細(xì)胞片或直接制備細(xì)胞涂片。二、固定根據(jù)需要...

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細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理

哺乳動(dòng)物細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染能在短期內(nèi)快速表達(dá)高活性蛋白而被廣泛應(yīng)用。那么細(xì)胞瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理是什么？讓我們一起來看看吧！哺乳動(dòng)物細(xì)胞自身具有蛋白折疊和翻譯后修飾的功能，獲得的蛋白更具有天然活性。哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)蛋白的方式有兩種：瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的特點(diǎn)是短期快速表達(dá)，滿足蛋白的小量制備。而穩(wěn)定轉(zhuǎn)染通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系能夠滿足蛋白的大量、長期生產(chǎn)。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的原理是指將構(gòu)建好的質(zhì)粒通過某種方式導(dǎo)入到哺乳動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)，該質(zhì)粒上的外源基因不整合到細(xì)胞自身的基因組上。隨著細(xì)胞的生長分裂，...

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ELISA主要材料試劑有哪些？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么ELISA主要材料試劑有哪些呢？讓我們一起來看看吧！一、抗原和抗體在ELISA實(shí)施過程中，抗原和抗體的質(zhì)量決定實(shí)驗(yàn)是否成功的關(guān)鍵因素。本法要求所用抗原純度高，抗體效價(jià)高、親和力強(qiáng)。ELISA所用抗原有三個(gè)來源：天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原。天然抗原取材于動(dòng)物...

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ELISA的常見問題有哪些？解決方法是什么？

酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzymelinkedimmunosorbentassay，簡寫ELISA或ELASA）指將可溶性的抗原或抗體結(jié)合到聚苯乙烯等固相載體上，利用抗原抗體特異性結(jié)合進(jìn)行免疫反應(yīng)的定性和定量檢測(cè)方法。那么你知道ELISA的常見問題有哪些？解決方法是什么嗎？讓我們一起來看看吧！一、高背景或陰性對(duì)照只偏高原因：1.陰性對(duì)照孔被陽性對(duì)照貨樣品污染2.抗體非特異性結(jié)合3.酶結(jié)合物過濃4.孵育溫度過高解決方法：1.洗滌是，勿將洗液溢出孔外2.封閉液不合適，更換封閉液3.請(qǐng)...

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