技術(shù)文章
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樣本種類繁多且復(fù)雜,有些樣本,要想提取到質(zhì)量良好的RNA是非常困難的,那么該如何確認(rèn)RNA的質(zhì)量呢?讓我們一起來看看吧!確認(rèn)RNA的質(zhì)量有以下兩種常見方法1)檢測RNA溶液的吸光度280、320、230、260nm下的吸光度分別代表了核酸、背景(溶液渾濁度)、鹽濃度和蛋白等有機(jī)物的值。一般的,我們只看OD260/OD280(Ratio,R)。1.82.0時(shí),我們認(rèn)為RNA中蛋白或者時(shí)其他有機(jī)物的污染是可以容忍的,不過要注意,當(dāng)你用Tris作為緩沖液檢測吸光度時(shí),R值可能會大于...
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分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常需要對樣本進(jìn)行濃度和純度的測定,它相當(dāng)于一種質(zhì)控,以此來確保下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可靠。那么該如何提高DNA純度測定的準(zhǔn)確性呢?讓我們一起來看看吧!常用的DNA濃度/純度測定設(shè)備是紫外分光光度計(jì),它的原理是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射吸收來進(jìn)行分析物質(zhì)成分。假設(shè)現(xiàn)在有一樣物質(zhì)A,它溶解在溶液內(nèi),當(dāng)光照射溶液時(shí),溶液內(nèi)的A會吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長,A對不同顏色的光(不同波長)的吸收程度是不一樣的。雙鏈的DNA,它能對波長為260nm的光進(jìn)行強(qiáng)...
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不同組織RNA提取原理是將細(xì)胞裂解,釋放出RNA,并通過不同方式去除蛋白,DNA等雜質(zhì),最終獲得高純度RNA產(chǎn)物的過程。那么你知道常見的RNA提取方法有什么嗎?讓我們一起來看看吧!一、酚氯仿抽提(有機(jī)試劑抽提)原理:將被裂解的生物樣本,混勻離心分相以后,RNA在上層水相,DNA,蛋白質(zhì)在中間層,下層有機(jī)相。收集水相加入乙醇或異丙醇可沉淀RNA,漂洗后得到RNA。優(yōu)點(diǎn):得率高、可提取到含miRNA和其他小RNA在內(nèi)的總RNA。缺點(diǎn):用到苯酚、氯仿等有毒試劑。二、硅膠柱法抽提原理...
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實(shí)驗(yàn)室工作中,經(jīng)常會需要用到純化的DNA,這時(shí)我們通常需要使用一個(gè)商業(yè)的DNA提取試劑盒對目的DNA進(jìn)行分離純化。那么我們該如何選擇合適的DNA提取試劑盒呢?讓我們一起來看看吧!一、試劑盒組分目前大多數(shù)DNA提取試劑盒遵循相同的基本步驟:裂解,柱純化,洗滌雜質(zhì),柱洗脫。然而,不同的盒子在完成每個(gè)步驟的方式上有很大的不同。二、使用的樣本類型不同的DNA來源有不同的試劑盒,從實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)的細(xì)胞,到臨床樣本,土壤樣本,甚至指紋,也有許多專門用于某些應(yīng)用的試劑盒。例如,土壤中的腐殖酸或...
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如今,大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用商業(yè)DNA提取試劑盒,這些試劑盒使用硅膠自旋過濾法來獲得高質(zhì)量的DNA。這些可以快速有效地純化DNA(或RNA)。那么DNA提取試劑盒的原理是什么呢?讓我們一起來看看吧!一、RNA和DNA提取裂解:裂解公式可能因您要提取DNA還是RNA而異,但共同點(diǎn)是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。Chaotropes(離液劑)的作用:Chaotrope會破壞氫鍵及疏水間的相互作用。離液鹽包括鹽酸胍、硫氰酸胍、尿素和高氯酸鋰。洗滌劑:除了離液劑外,裂解緩沖液中通常還有一...
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