Elisa檢測(cè)之組織樣本的處理方法

更新時(shí)間：2024-10-21

點(diǎn)擊次數(shù)：1842

Elisa是一種快速、靈敏、準(zhǔn)確可靠的定性定量分析方法。樣本的處理對(duì)于Elisa 實(shí)驗(yàn)的成功起著關(guān)鍵的作用。

組織樣本一般制成組織勻漿，處理方法如下：

(1) 使用干凈的工具解剖目標(biāo)組織，盡快置于冰上，以防被蛋白酶降解。（暫時(shí)不處理的組織，置于圓底微量離心管中，浸入液氮中“速凍"，在 -80℃ 下存儲(chǔ)樣品備用）。

(2) 用預(yù)冷的 PBS 緩沖液（0.01M，pH=7.4）洗滌組織去除殘留的血液，稱重后備用。若組織塊較大，需先剪碎。
(3)在冰上用研磨緩沖液（常用 PBS 緩沖液，但最好使用 50mM Tris+0.9%NaCL+0.1% SDS,PH 7.3?；蛘咧械葟?qiáng)度 RIPA 細(xì)胞裂解液，注意 RIPA 裂解液 PH 值需為 PH7.3，建議不要使用含 NP-40，Triton X-100 和高濃度 DTT 的組分，會(huì)抑制抗原抗體反應(yīng)。）研磨組織勻漿（加入研磨緩沖液的體積取決于組織的重量。一般情況下，每 1 克組織碎片應(yīng)使用 9ml 研磨緩沖液。另外建議在研磨緩沖液中加入一些蛋白酶抑制劑，如1mM PMSF）。得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中，需冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù) 2次）。
(4)將制備好的勻漿液于 5000×g 離心 5 分鐘，留取上清即可檢測(cè)?；蚍盅b凍存于-20℃或-80℃。
(5)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要，組織勻漿樣本可先定量總蛋白,以便于統(tǒng)計(jì)分析數(shù)據(jù)，一般調(diào)整總蛋白濃度至 1-3mg/ml。某些組織樣本，如肝臟，腎臟，胰腺因含有較高濃度的內(nèi)源性過氧物酶, 在樣品濃度較高的情況下會(huì)和試劑盒底物反應(yīng)出現(xiàn)假陽性。
注意事項(xiàng)：
若為皮膚組織，離心后，需去除上層脂肪，以及下層沉淀，取中間層樣本用于檢測(cè)。