原代細(xì)胞分離培養(yǎng)是一項實驗技術(shù)，它涉及從生物體中提取組織或細(xì)胞，并將它們轉(zhuǎn)移到體外環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。這些來源包括各種組織器官、外周血和胚胎等。在培養(yǎng)過程中，原代細(xì)胞的生長速度相對較慢，通常在培養(yǎng)的10代內(nèi)停止生長。因此，通常將培養(yǎng)的細(xì)胞歸類為原代細(xì)胞培養(yǎng)，這些細(xì)胞包括第1到第10代的細(xì)胞。下面讓我們一起來看看原代細(xì)胞分離的原理吧！

　　實驗原理：

　　原代細(xì)胞保持了體內(nèi)原始細(xì)胞的生物學(xué)特性，接近于體內(nèi)的生長特性。因此，它們?yōu)檠芯可矬w細(xì)胞的生長、代謝和繁殖提供了有力的工具。此外，原代細(xì)胞培養(yǎng)還為精準(zhǔn)醫(yī)療的腫瘤診治模式和個體化精準(zhǔn)用藥提供了支持。

　　常見的原代細(xì)胞類型包括上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、黑色素細(xì)胞、神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、肌細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、滑膜細(xì)胞、毛細(xì)胞、血細(xì)胞和干細(xì)胞。

　　在原代細(xì)胞分離培養(yǎng)中，首先從動物體內(nèi)取出各種組織，然后采用不同的方法，如酶消化（通常使用胰蛋白酶/膠原酶）、螯合劑（通常是EDTA）或機(jī)械分散，將組織分散成單個細(xì)胞。這些單細(xì)胞被放置在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，以在離體環(huán)境中存活、生長和繁殖。這個過程稱為原代培養(yǎng)，主要包括取材、分離和培養(yǎng)三個步驟。

　　以小鼠結(jié)腸細(xì)胞為例，為了提高目標(biāo)細(xì)胞的純度，原代提取的細(xì)胞通常與其他細(xì)胞混合。通過采用生物酶梯度消化和差速貼壁等方法，可以獲得纖維組織和上皮組織的高純度目標(biāo)細(xì)胞。具體地，使用膠原酶I和分散酶II消化結(jié)腸組織可分散細(xì)胞間質(zhì)，而差異消化和差速貼壁方法則能有效去除成纖維細(xì)胞，最終獲得高度純凈的結(jié)腸上皮細(xì)胞。

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