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細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法

更新時間:2024-03-23點擊次數(shù):835
  轉(zhuǎn)染(Transfection),是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入,轉(zhuǎn)染目前已成為實驗室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。
  轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。那么你知道細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有什么嗎?讓我們一起來看看吧!
  轉(zhuǎn)染大致可分為物理介導(dǎo)、化學(xué)介導(dǎo)和生物介導(dǎo)三類途徑。
  一、化學(xué)轉(zhuǎn)染法:
  1.磷酸鈣法
  原理:磷酸鈣DNA復(fù)合物吸附細(xì)胞膜被細(xì)胞內(nèi)吞
  應(yīng)用:穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)
  特點:不適用于原代細(xì)胞,操作簡便但重復(fù)性差,有些細(xì)胞不適用
  2.陽離子脂質(zhì)法
  原理:帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)形成復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞
  應(yīng)用:穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn),所有細(xì)胞
  特點:適用性廣,轉(zhuǎn)染效率高,重復(fù)性好,但轉(zhuǎn)染時需除血清,轉(zhuǎn)染效果隨細(xì)胞類型變化大
  3.DEAE-右旋糖苷法
  原理:帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負(fù)電的磷酸骨架相互作用形成的復(fù)合物被細(xì)胞內(nèi)吞
  應(yīng)用:瞬轉(zhuǎn)
  特點:相對簡便、結(jié)果可重復(fù),但對細(xì)胞有一定的毒副作用,轉(zhuǎn)染時需除血清
  二、生物轉(zhuǎn)染法
  1.病毒介導(dǎo)法
  原理:通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中
  應(yīng)用:穩(wěn)轉(zhuǎn)
  特點:可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞、原代細(xì)胞,體內(nèi)細(xì)胞等
  2.逆轉(zhuǎn)錄病毒
  應(yīng)用:持定宿主
  特點:但攜帶基因不能太大細(xì)胞需處分裂,需考慮安全因素
  3.腺病毒
  原理:通過侵染宿主細(xì)胞將外源基因整合到染色體中
  應(yīng)用:瞬時轉(zhuǎn)染,待定宿主
  特點:可用于難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞,需考慮安全因素
  三、物理轉(zhuǎn)染法
  1.Biolistic顆粒傳遞法
  原理:將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀,再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細(xì)胞,DNA在細(xì)胞內(nèi)逐步釋放表達(dá)
  應(yīng)用:瞬轉(zhuǎn)
  特點:可用于:人的表皮細(xì)胞,纖維原細(xì)胞,淋巴細(xì)胞系以及原代細(xì)胞
  2.電穿孔法
  原理:高脈沖電壓破壞細(xì)胞膜電位,DNA通過膜上形成的小孔導(dǎo)入
  應(yīng)用:穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn),所有細(xì)胞
  特點:適用性廣但細(xì)胞致死率高,DNA和細(xì)胞用量大
  3.顯微注射法
  原理:用顯微操作將DNA直接注入靶細(xì)胞核
  應(yīng)用:穩(wěn)轉(zhuǎn),瞬轉(zhuǎn)
  特點:染細(xì)胞數(shù)有限,多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細(xì)胞
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