Elabscience谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)比色法測試盒適用于檢測血清、血漿、培養(yǎng)細(xì)胞、培養(yǎng)液及動植物組織樣本中的GSH-Px 活力。

GSH-Px的作用是促進(jìn)過氧化氫（H₂O₂）與還原型谷胱甘肽（GSH）反應(yīng)生成水（H2O）和氧化型谷胱甘肽（GSSG），反應(yīng)式如下圖所示。為了表示酶的活力，可以測定單位時間內(nèi)底物GSH被氧化的速度。剩余的GSH與二硫代雙硝基苯甲酸（DTNB）發(fā)生反應(yīng)，生成黃色的硫代硝基苯甲酸陰離子（TNB），通過測定該陰離子的濃度來計算GSH的減少量。由于在沒有酶的條件下，GSH也會發(fā)生氧化（非酶反應(yīng)），因此在計算酶活力時，需要扣除非酶反應(yīng)引起的GSH減少量。

實驗關(guān)鍵點

① 非酶管及酶管加入試劑二離心后的上清液必須澄清。

② 樣本處理后必須做預(yù)實驗。

③ 試劑一應(yīng)用液必須在 37℃預(yù)溫 5 min。

④ 當(dāng)抑制率小于 10%時，可增加樣本量。

操作步驟

酶促反應(yīng)：

① 非酶管：取20μL 1 mmol/L GSH 標(biāo)準(zhǔn)品，加入1.5 mL EP管中；

酶管：取20μL 1mmol/L GSH 標(biāo)準(zhǔn)品，20μL待測樣本，加入1.5 mL EP管中混勻。

② 將酶管、非酶管及試劑一應(yīng)用液 37℃預(yù)溫5 min。

③ 向酶管和非酶管加入10μL試劑一應(yīng)用液，混勻，37℃準(zhǔn)確反應(yīng) 5 min。

④ 向非酶管加入200μL試劑二和20μL 待測樣本，混勻；向酶管加入200μL試劑二，混勻。

⑤ 3100×g離心0 min，取100μL上清液作顯色反應(yīng)。（若上清液中含有部分沉淀物，將上清液轉(zhuǎn)入新的EP管中，再次離心）

顯色反應(yīng)：

① 標(biāo)準(zhǔn)孔：取100μL不同濃度標(biāo)準(zhǔn)品，加入到對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)孔中：

非酶孔：取100μL非酶管中的上清，加入到非酶孔中；

酶孔：取100μL酶管中的上清，加入到酶孔中。

② 向步驟①中各孔分別加入100μL試劑三。

③ 向步驟②中各管分別加入50μL試劑四。

④ 酶標(biāo)儀上震板10 s，靜置5 min，酶標(biāo)儀412 nm，測其吸光度值。

注：當(dāng)樣本抑制率小于10%時，可增加樣本量進(jìn)行檢測。

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