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重點推介:Wako預(yù)制膠SuperSep™ Phos-tag™(195-17991/198-17981)

更新時間:2023-11-17點擊次數(shù):1461

Phos-tag™ 是一種能與磷酸離子特異性結(jié)合的功能分子,可與蛋白上的磷酸基團(tuán)結(jié)合。在SDS-PAGE中,在有二價金屬離子(Mn2+/Zn2+)參與的條件下,磷酸化蛋白與Phos-tag™ 結(jié)合,電泳遷移速度變慢,從而與非磷酸化蛋白分離。

WakoSuperSepPhos-tag™ 是一種即開即用型的預(yù)制膠,含有50 μmol/LPhos-tag™ 丙烯酰胺,含有Zn2+ 作為金屬離子,保存穩(wěn)定性長達(dá)半年,得到的條帶整齊。多種規(guī)格型號,適合Bio-rad/Life Technolofies/EasySeperator等多種電泳儀。全批次均經(jīng)過嚴(yán)格檢驗,保證能分離磷酸化與非磷酸化條帶。

圖片1.png 

應(yīng)用實例:

1. β-casein

圖片2.png 

使用Tris-甘氨酸(TG),Tris-TricineTT)或Tris-MOPSTM)三種不同runningbuffer比較β-caseinSuperSepTMPhos-tagTM預(yù)制膠中磷酸化蛋白的遷移率。

2. 鼠腦來源Dnmt1磷酸化實驗

圖片3.png 

從鼠腦提取液中純化得到GST-Dnmt11-290)結(jié)合蛋白,作為體外激酶實驗的反應(yīng)底物,在SuperSepPhos-tag™ 預(yù)制膠中檢測到了激酶的存在。

3. 二維電泳分析hnRNP K磷酸化異構(gòu)體

圖片4.png

小鼠巨噬細(xì)胞J774.1 經(jīng)LPS 刺激后,裂解細(xì)胞,經(jīng)過免疫沉淀法分離得到hnRNP K。在二維電泳中,一維是IPG 膠,二維是SuperSepPhos-tag™ 預(yù)制膠,可分離hnRNP K 的異構(gòu)體。利用質(zhì)譜儀確認(rèn)不同的點代表不同的亞型或修飾蛋白。

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