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ATCC細胞庫介紹及其使用方法

更新時間:2023-05-08點擊次數(shù):2733

ATCC細胞庫介紹:

ATCC(美國模式菌種收集中心),又稱為美國菌種保藏中心, 是位于馬里蘭洲洛克菲勒的一家私營的,非贏利性組織,可提供各種動植物細胞、標準品、菌株達兩萬多種。ATCC的創(chuàng)立源于1925年某科學(xué)委員會意識到,科學(xué)研究對于微生物的需求增大,從而萌發(fā)了一個想法:創(chuàng)建一個微生物相關(guān)制品供應(yīng)中心。至今,ATCC向世界各地的政府、企業(yè)、科研機構(gòu)提供生物制品、技術(shù)支持和培訓(xùn),成為了一個以非盈利為目的的全球性質(zhì)的生物資源中心。ATCC擁有目前世界上zui大的、品種zui豐富的微生物、細胞系以及重組DNA原料,同時它也是科研工作者gogn ren的提供shijieji的可靠的研究材料的供應(yīng)商。

ATCC細胞的使用方法:

1、細胞收到后的操作方法:

  取25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置4-6小時或隔夜,以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。然后,用75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,收集瓶內(nèi)液體于50ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用6ml細胞培養(yǎng)基重懸,全部接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,再放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。如果離心后細胞量很多,可以直接1:2分瓶培養(yǎng)。

2、細胞傳代:

細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時,收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm5min,棄上清,用12ml細胞培養(yǎng)基重懸細胞,按1:2的比例進行接種傳代,接種到25cm2培養(yǎng)瓶中,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng),2-3天更換培養(yǎng)液。  

3、細胞凍存:

a、細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的85%及以上面積時,收集瓶內(nèi)液體于15ml離心管中,1000rpm離心5min,棄上清,用適當量的凍存液(基礎(chǔ)培養(yǎng)基:FBSDMSO=5:4:1)重懸細胞,并放置于凍存管中。

b、先將細胞凍存管放置于40.5h,再放置于-201.5h,然后將其移入-80℃隔夜,24h后可轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。

4、細胞復(fù)蘇:

a、從液氮中取出細胞凍存管,快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁。

b、將凍存管中的細胞移至含有5ml細胞培養(yǎng)液的15ml離心管中,然后1000rpm/min,離心5min。

c、棄上清,沉淀細胞用6ml細胞培養(yǎng)基重懸,接種到培養(yǎng)瓶中,最后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

d、第二天,換用新鮮細胞培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。


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